ヒトサイトメガロウイルスサブウイルス高密度体とのインキュベーションによる線維芽細胞および内皮細胞のプロテオーム変化

Scientific Data volume 10、記事番号: 517 (2023) この記事を引用

メトリクスの詳細

ヒトサイトメガロウイルス (HCMV) は、医学的に関連性の高い病原体です。 サブウイルス密集体 (DB) は、HCMV 感染の深刻な結果を改善するワクチン候補として開発されました。 このようなヒトへの適用のための候補ワクチンの開発には、宿主との相互作用に関する詳細な知識が必要です。 DB に曝露された細胞培養細胞のプロテオームの変化に関して、包括的な質量分析 (MS) ベースの分析が実行されました。

ヒトサイトメガロウイルス（HCMV）はβヘルペスウイルスであり、世界中で先天性感染症の主な原因となっており、難聴、視覚障害、認知障害などの多くの後遺症を引き起こします1。 全身性免疫抑制の状況では、HCMV 感染はかなりの罹患率と死亡率を引き起こす可能性があります 1。 HCMV に感染した線維芽細胞は、高密度体と呼ばれる非感染性粒子を細胞培養上清中に大量に放出します 2,3。 単離された DB の質量分析は、そのタンパク質組成の解明に貢献し、HCMV4,5 に対する適応免疫応答の重要な抗原の存在を明らかにしました。 一方、インビトロ実験と動物研究では、DB が顕著に免疫原性があり、強力なインターフェロン (IFN) 応答を誘導することが示されました 6、7、8、9、10、11。 その結果、DB は HCMV に対する有望なワクチンとして考えられています12,13。 臨床試験および最終的な認可における候補ワクチンのヒトへの適用に関しては、潜在的な副作用と忍容性を評価するために、宿主細胞に対するワクチンの影響に関する包括的な知識が重要です。 培養線維芽細胞および内皮細胞に対する DB の影響に関するデータセットは、質量分析 (MS) を使用して生成されました。 これらのデータセットは、DB 曝露時のインターフェロン β 応答と線維芽細胞および内皮細胞におけるインターフェロン刺激遺伝子 (ISG) 発現の誘導の研究に焦点を当てた以前の出版物で使用されました 11。

初代ヒト包皮線維芽細胞 (HFF) は 1994 年に新生児の包皮から確立され、過去に研究に使用されました 6、7、14、15、16。 これらの細胞を研究に使用する承認は、ドイツのラインラント・プファルツ州医療評議会の倫理委員会から得られました。 HFF は、5% ウシ胎児血清 (FCS)、100 mg/l L-グルタミン、0.5 ng/ml 塩基性線維芽細胞増殖因子 (bFGF、Invitrogen、カールスルーエ、ドイツ）およびゲンタマイシン（5 mg/l）。 実験には、16 ～ 19 の HFF 細胞継代数を使用しました。 HEC-LTT 細胞は Dagmar Wirth らによって樹立されました17。 この細胞は、SV40ラージT抗原およびヒトテロメラーゼ逆転写酵素(hTERT)のテトラサイクリン依存性発現により条件的に不死化されたヒト臍帯静脈内皮細胞(HUVEC)に由来する。 培養のために、培養容器を０．１％ゼラチン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、セントルイス、ミズーリ州）で少なくとも３０分間コーティングした。 HEC-LTT細胞は、2μg/mLのドキシサイクリン（Sigma-Aldrich、ミズーリ州セントルイス）を補充した内皮増殖培地（EGM BulletKit; Lonza Sales Ltd.、バーゼル、スイス）中で維持した。 HEC-LTT 細胞の増殖はドキシサイクリン (DOX) によって制御できます。 DOX を添加すると、不死化タンパク質 hTERT および SV40 ラージ T 抗原の発現が活性化され、細胞増殖が起こります。 ドキシサイクリンは実験全体を通じて省略されました。 HEC-LTT 細胞を研究目的で使用する許可は、ヘルムホルツ感染症研究センター (HZI) による物質譲渡契約を通じて付与されました。 細胞は HCMV 感染に対して寛容であることが示されました 18。 HEC-LTT は、Christian Sinzger (ドイツ、ウルムのウルム大学医療センターウイルス学研究所) のご好意で私たちに送っていただき、継代 41 から継代 55 までの実験に使用されました。